detekce diodového pole lze použít k identifikaci neznámých píků pozorovaných v chromatografii

Jerry “Junior” Mizell
Associate Director, Analytical Services

detekce diodového pole (DAD) nebo detekce Fotodiodového pole (PDA) je analytická technika, kterou lze použít ke stanovení čistoty analytu nebo souvisejícího špičkového eluování nečistot během separace HPLC.

použití DAD k prokázání specifičnosti metody je povoleno obecnými zásadami Mezinárodní rady pro harmonizaci (ICH) Q2(R1).

detektor diodového pole používá stejné principy činnosti jako detektor s proměnnou vlnovou délkou (VWD). Nicméně, pole diod umožňuje současné získávání v celém rozsahu vlnových délek, spíše než jen jeden. Spektrální akvizice používaná ve spojení s chromatografickou separací je technika, která umožňuje analytikovi shromažďovat více spekter přes chromatografický vrchol. Jakmile jsou tato spektra shromážděna z analýzy HPLC, lze je použít k matematickému posouzení spektrální čistoty špiček a možné identifikace.

během rutinní analýzy vzorku byl při chromatografii pro přípravu vzorku pozorován vrchol nečistoty eluující přibližně 52 minut. Tento vrchol měl podobný retenční čas podezření na degradant a byla zahájena pozitivní identifikační analýza pomocí DAD. Aby bylo možné určit, co byla neznámá nečistota, byly analyzovány roztoky markerů vzorků a nečistot pomocí validované metody indikující stabilitu využívající detekci diodového pole. Ze shromážděných spektrálních dat byl proveden pokus o identifikaci nečistot pozorovaných při přípravě vzorku.

chromatogram přípravku vzorku a extrahovaná UV / VIS spektra jsou znázorněny na obrázcích 1 a 2. Na obrázcích 3 a 4 je znázorněn chromatogram přípravku nečistot a extrahovaná UV/VIS spektra.

Obrázek 1. Chromatogram přípravku vzorku obsahujícího nečistotu po 52 minutách

Obrázek 2. Extrahovaná UV spektra pro chromatografické píky znázorněné na obrázku 1

obrázek 3. Příprava markerů nečistot pro podezření na neznámou nečistotu

obrázek 4. Extrahované UV / VIS spektrum přípravy markerů nečistot

v tomto bodě bylo extrahované UV / VIS spektrum pro neznámou nečistotu znázorněnou na obrázku 2 porovnáno se spektrem UV/VIS znázorněným na obrázku 4 pro známou nečistotu. Jak neznámá nečistota, tak známá nečistota vykazovaly podobný profil UV / VIS s oběma spektry obsahujícími primární UV maxima v rozsahu 261 nm až 263 nm.

je třeba poznamenat, že sekundární UV maximum na obrázku 2 je způsobeno nezákladním rozlišením mezi nečistotou a aktivním. Spolu s retenčním časem to potvrzuje totožnost nečistoty v přípravku vzorku.

Toto je velmi jednoduchý a přímočarý příklad toho, jak lze detekci diodového pole (DAD) použít k identifikaci neznámých píků, pokud jsou pozorovány v chromatografii.

Junior Mizell řídí tým vedoucích skupin odpovědných za provádění analytických laboratorních služeb pro klienty metrických smluvních služeb. Mimo jiné kontroluje a schvaluje regulační podání; přezkoumává SPECIFIKACE, validaci metodiky, testování stability, analytická vyšetřování a zprávy o vydání surových a procesních materiálů, aktivních farmaceutických složek a hotových výrobků; a přezkoumává a schvaluje protokoly a zprávy o validaci metod. Člen Americké chemické společnosti a AAPS, Pan. Mizell nastoupil do Metrics v roce 1995 poté, co pracoval v Burroughs Wellcome, nyní součástí GSK. Je držitelem bakalářského titulu z chemie na East Carolina University.