diode-array detektion kan bruges til at identificere ukendte toppe observeret i kromatografi

af Jerry “Junior” Misell
associeret direktør, analytiske tjenester

diode-array Detection (DAD) eller Photodiode-Array Detection (PDA) er en analytisk teknik, der kan bruges til at bestemme renheden af en analyt eller relateret urenhed peak eluering under en HPLC-adskillelse.

brug af DAD til at demonstrere metodespecificitet er tilladt af Det Internationale Råd for harmonisering (ich) retningslinje 2.kvartal(R1).

diode array detektoren bruger de samme principper for drift som en variabel bølgelængdedetektor (VVD). Imidlertid muliggør arrayet af dioder samtidig erhvervelse på tværs af en række bølgelængder snarere end blot en enkelt. Spektral erhvervelse anvendt i forbindelse med en kromatografisk adskillelse er en teknik, der gør det muligt for analytikeren at samle flere spektre på tværs af en kromatografisk top. Når disse spektre er indsamlet fra en HPLC-analyse, kan de bruges til at udføre en vurdering af spektral peak renhed matematisk og mulig identifikation.

under en rutinemæssig prøveanalyse blev der observeret en urenhedstop-eluering ved ca.52 minutter i kromatografi for et prøvepræparat. Denne top havde en lignende retentionstid for en mistænkt nedbrydningsmiddel, og positiv identifikationsanalyse ved hjælp af DAD blev påbegyndt. For at bestemme, hvad den ukendte urenhed var, prøve-og urenhedsmarkøropløsninger blev analyseret ved hjælp af den validerede stabilitetsindikeringsmetode, der anvender Diodearray-detektion. Fra indsamlede spektraldata skulle der gøres et forsøg på at identificere den urenhed, der blev observeret i prøvepræparatet.

et kromatogram af prøvepræparatet og ekstraherede UV/VIS-spektre er vist i henholdsvis Figur 1 og 2. Et kromatogram af urenhedspræparatet og ekstraherede UV/VIS-spektre er vist i henholdsvis figur 3 og 4.

Figur 1. Kromatogram af prøvepræparat indeholdende urenhed efter 52 minutter

figur 2. Ekstraherede UV-spektre til kromatografiske toppe vist i Figur 1

figur 3. Urenhedsmarkør forberedelse af mistænkt ukendt urenhed

figur 4. Ekstraheret UV / VIS spektrum af urenhedsmarkørpræparat

på dette tidspunkt blev det ekstraherede UV/VIS-spektrum for den ukendte urenhed vist i figur 2 sammenlignet med UV/VIS-spektret vist i figur 4 for den kendte urenhed. Både den ukendte Urenhed og den kendte urenhed udviste en lignende UV / VIS-profil med begge spektre indeholdende primære UV-Maksima i området 261 nm til 263 nm.

det bemærkes, at det sekundære UV-maksimum i figur 2 skyldes ikke-baseline opløsning mellem Urenheden og den aktive. Sammen med retentionstid bekræfter dette identiteten af urenheden i Prøveforberedelsen.

dette er et meget simpelt og ligetil eksempel på, hvordan diode-array Detection (DAD) kan bruges til at identificere ukendte toppe, når de observeres i kromatografi.

Junior forvalter et team af gruppeledere, der er ansvarlige for at udføre analytiske laboratorietjenester til Metrics Contract Services-klienter. Blandt andre opgaver gennemgår og godkender han lovgivningsmæssige indlæg; gennemgår SPECIFIKATIONER, metodevalidering, stabilitetstest, analytiske undersøgelser og frigivelsesrapporter for rå og procesmaterialer, aktive farmaceutiske ingredienser og færdige produkter; og gennemgår og godkender metodevalideringsprotokoller og rapporter. Et medlem af American Chemical Society og AAPS, Hr. Han sluttede sig til Metrics i 1995 efter at have arbejdet hos Burroughs, nu en del af GSK. Han har en Bachelor of science grad i kemi fra East Carolina University.