Die Dioden-Array-Detektion kann verwendet werden, um unbekannte Peaks zu identifizieren, die in der Chromatographie beobachtet wurden

Von Jerry “Junior” Mizell
Associate Director, Analytical Services

Die Dioden-Array-Detektion (DAD) oder die Photodioden-Array-Detektion (PDA) ist eine Analysetechnik, mit der die Reinheit eines Analyten oder die zugehörige Verunreinigungspeak-Eluierung während einer HPLC-Trennung bestimmt werden kann.

Die Verwendung von DAD zum Nachweis der Methodenspezifität ist in der Richtlinie Q2(R1) des Internationalen Harmonisierungsrates (ICH) zulässig.

Der Diodenarray-Detektor verwendet die gleichen Funktionsprinzipien wie ein Detektor mit variabler Wellenlänge (VWD). Die Anordnung der Dioden ermöglicht jedoch die gleichzeitige Erfassung über einen Bereich von Wellenlängen und nicht nur über einen einzigen. Die spektrale Erfassung, die in Verbindung mit einer chromatographischen Trennung verwendet wird, ist eine Technik, die es dem Analytiker ermöglicht, mehrere Spektren über einen chromatographischen Peak zu sammeln. Sobald diese Spektren aus einer HPLC-Analyse gesammelt wurden, können sie verwendet werden, um eine Bewertung der spektralen Peakreinheit mathematisch und mögliche Identifizierung durchzuführen.

Während einer routinemäßigen Probenanalyse wurde in der Chromatographie für eine Probenvorbereitung ein Verunreinigungspeak beobachtet, der nach etwa 52 Minuten eluierte. Dieser Peak hatte eine ähnliche Retentionszeit wie ein vermuteter Abbaustoff und eine positive Identifikationsanalyse unter Verwendung von DAD wurde begonnen. Um die unbekannte Verunreinigung zu bestimmen, wurden Proben- und Verunreinigungsmarkerlösungen unter Verwendung der validierten Stabilitätsanzeigemethode unter Verwendung der Diodenarray-Detektion analysiert. Aus den gesammelten Spektraldaten sollte versucht werden, die in der Probenvorbereitung beobachtete Verunreinigung zu identifizieren.

Ein Chromatogramm der Probenvorbereitung und extrahierte UV/VIS-Spektren sind in den Abbildungen 1 bzw. 2 dargestellt. Ein Chromatogramm der Verunreinigungspräparation und extrahierte UV / VIS-Spektren sind in den Abbildungen 3 bzw. 4 dargestellt.

Abbildung 1. Chromatogramm der Probenvorbereitung mit Verunreinigung nach 52 Minuten

Abbildung 2. Extrahierte UV-Spektren für chromatographische Peaks in Abbildung 1

Abbildung 3. Verunreinigung Marker Vorbereitung der vermuteten unbekannten Verunreinigung

Abbildung 4. Extrahiertes UV / VIS-Spektrum der Verunreinigungsmarkerpräparation

Zu diesem Zeitpunkt wurde das extrahierte UV/VIS-Spektrum für die unbekannte Verunreinigung gemäß Abbildung 2 mit dem UV/VIS-Spektrum gemäß Abbildung 4 für die bekannte Verunreinigung verglichen. Sowohl die unbekannte als auch die bekannte Verunreinigung zeigten ein ähnliches UV/VIS-Profil, wobei beide Spektren primäre UV-Maxima im Bereich von 261 nm bis 263 nm enthielten.

Es wird darauf hingewiesen, dass das sekundäre UV-Maximum in Abbildung 2 auf eine Nicht-Baseline-Auflösung zwischen der Verunreinigung und dem Aktiven zurückzuführen ist. Zusammen mit der Retentionszeit bestätigt dies die Identität der Verunreinigung in der Probenvorbereitung.

Dies ist ein sehr einfaches und unkompliziertes Beispiel dafür, wie die Diodenarray-Detektion (DAD) verwendet werden kann, um unbekannte Peaks zu identifizieren, wenn sie in der Chromatographie beobachtet werden.

Junior Mizell leitet ein Team von Gruppenleitern, die für die Durchführung analytischer Labordienstleistungen für Kunden von Metrics Contract Services verantwortlich sind. Unter anderem prüft und genehmigt er behördliche Einreichungen; überprüft Spezifikationen, Methodenvalidierung, Stabilitätstests, analytische Untersuchungen und Freigabeberichte für Roh- und In-Process-Materialien, pharmazeutische Wirkstoffe und Fertigprodukte; und überprüft und genehmigt Methodenvalidierungsprotokolle und -berichte. Ein Mitglied der American Chemical Society und AAPS, Herr. Mizell kam 1995 zu Metrics, nachdem er bei Burroughs Wellcome, heute Teil von GSK, gearbeitet hatte. Er hat einen Bachelor of Science in Chemie von der East Carolina University.