diodi-Array Detection can be used to identifying unknown peaks observed in kromatography

by Jerry “Junior” Mizell
Associate Director, analytic Services

diodi-Array Detection (dad) or Photodiode-Array Detection (PDA) on analyyttinen tekniikka, jota voidaan käyttää määrittämään analyytin tai siihen liittyvän epäpuhtaushuipun puhtaus HPLC-erotuksen aikana.

kansainvälisen Yhdenmukaistamisneuvoston (ICH) ohje Q2(R1) sallii DAD-valmisteen käytön menetelmän spesifisyyden osoittamiseen.

diodirividetektori käyttää samoja toimintaperiaatteita kuin muuttuvan aallonpituuden detektori (vWD). Diodien joukko mahdollistaa kuitenkin samanaikaisen hankinnan useilla eri aallonpituuksilla, eikä vain yhdellä. Kromatografisen erotuksen yhteydessä käytettävä spektrin hankinta on tekniikka, jonka avulla analyytikko voi kerätä useita spektrejä kromatografisen piikin yli. Kun nämä spektrit on kerätty HPLC-analyysistä, niitä voidaan käyttää spektripiikin puhtauden arviointiin matemaattisesti ja mahdolliseen tunnistamiseen.

rutiinianalyysin aikana havaittiin kromatografiassa epäpuhtaushuippu, joka eluoitui noin 52 minuutissa näytteiden valmistusta varten. Tämä huippu oli samanlainen retentioaika epäillyn hajoamista ja positiivinen tunnistusanalyysi käyttäen DAD aloitettiin. Tuntemattoman epäpuhtauden määrittämiseksi näyte-ja epäpuhtausmerkkiliuokset analysoitiin validoidulla stabiilisuuden osoittamismenetelmällä, jossa käytettiin Diodirividetektoria. Kerätystä spektriaineistosta pyrittiin tunnistamaan näytteen valmistuksessa havaittu epäpuhtaus.

kuvissa 1 esitetään kromatogrammi näytteenvalmistuksesta ja uutettu UV/VIS-spektri 2. Kuvissa 3 esitetään epäpuhtausvalmisteen kromatogrammi ja 4 uutettu UV/VIS-spektri.

Kuva 1. Epäpuhtautta sisältävän näytevalmisteen kromatogrammi 52 minuutin kuluttua

kuva 2. Uutetut UV-spektrit Kuvassa esitettyjen kromatografisten piikkien osalta 1

kuva 3. Epäpuhtausmerkin valmistelu epäillystä tuntemattomasta epäpuhtaudesta

Kuva 4. Uutettu EPÄPUHTAUSMERKKIVALMISTEEN UV / VIS-spektri

tässä vaiheessa kuviossa 2 esitettyä tuntemattoman epäpuhtauden UV/VIS-spektriä verrattiin Kuvassa 4 esitettyyn tunnetun epäpuhtauden UV/VIS-spektriin. Sekä tuntemattomalla epäpuhtaudella että tunnetulla epäpuhtaudella oli samanlainen UV/VIS-profiili, ja molemmat spektrit sisälsivät primaarisia UV-maksimeja alueella 261-263 nm.

on huomattava, että sekundaarinen UV-maksimi kuvassa 2 johtuu epäpuhtauden ja aktiivisen aineen erotuskyvystä, joka ei ole lähtötilanteessa. Retentioajan lisäksi tämä vahvistaa näytteen valmistuksessa olevan epäpuhtauden identiteetin.

tämä on hyvin yksinkertainen ja suoraviivainen esimerkki siitä, miten Diodirividetektoria (DAD) voidaan käyttää tuntemattomien piikkien tunnistamiseen kromatografiassa havaittaessa.

Junior Mizell johtaa ryhmän johtajia, jotka vastaavat analyysilaboratoriopalvelujen suorittamisesta Metrics-Sopimuspalveluasiakkaille. Muiden tehtävien ohella hän tarkastelee ja hyväksyy säädösehdotuksia; tarkastelee eritelmiä, menetelmien validointia, stabiiliustestausta, analyyttisiä tutkimuksia ja julkaisuraportteja raaka-ja prosessinaikaisille materiaaleille, vaikuttaville farmaseuttisille ainesosille ja valmiille tuotteille; sekä arvioi ja hyväksyy menetelmän validointiprotokollat ja raportit. American Chemical Societyn ja AAPS: n jäsen. Mizell liittyi Metricsiin vuonna 1995 työskenneltyään Burroughs Wellcomella, joka on nykyään osa GSK: ta. Hänellä on luonnontieteiden kandidaatin tutkinto kemiasta Itä-Carolinan yliopistosta.