La détection de réseaux de diodes peut être utilisée pour identifier les pics inconnus observés en chromatographie

Par Jerry “Junior” Mizell
Directeur associé, Services d’analyse

La Détection de réseaux de diodes (DAD) ou la Détection de réseaux de Photodiodes (PDA) est une technique analytique qui peut être utilisée pour déterminer la pureté d’un analyte ou d’un pic d’impureté associé lors d’une séparation HPLC.

L’utilisation de la DAD pour démontrer la spécificité de la méthode est autorisée par la directive Q2 (R1) du Conseil international d’harmonisation (ICH).

Le détecteur à réseau de diodes utilise les mêmes principes de fonctionnement qu’un détecteur à longueur d’onde variable (VWD). Cependant, le réseau de diodes permet une acquisition simultanée sur une gamme de longueurs d’onde, plutôt qu’une seule. L’acquisition spectrale utilisée en conjonction avec une séparation chromatographique est une technique qui permet à l’analyste de collecter plusieurs spectres sur un pic chromatographique. Une fois que ces spectres ont été collectés à partir d’une analyse HPLC, ils peuvent être utilisés pour effectuer une évaluation mathématique de la pureté du pic spectral et une identification possible.

Au cours d’une analyse d’échantillon de routine, un pic d’impureté éluant à environ 52 minutes a été observé en chromatographie pour une préparation d’échantillon. Ce pic avait un temps de rétention similaire à celui d’un produit de dégradation présumé et une analyse d’identification positive à l’aide de la DAD a été lancée. Afin de déterminer quelle était l’impureté inconnue, des solutions d’échantillons et de marqueurs d’impuretés ont été analysées à l’aide de la méthode d’indication de stabilité validée utilisant la détection par réseau de diodes. À partir des données spectrales collectées, on allait tenter d’identifier l’impureté observée dans la préparation de l’échantillon.

Un chromatogramme de la préparation de l’échantillon et des spectres UV/VIS extraits sont représentés sur les figures 1 et 2, respectivement. Un chromatogramme de la préparation d’impureté et des spectres UV/VIS extraits sont représentés sur les figures 3 et 4, respectivement.

Figure 1. Chromatogramme de préparation d’échantillon contenant des impuretés à 52 minutes

Figure 2. Spectres UV extraits pour les pics chromatographiques représentés sur la figure 1

Figure 3. Préparation du marqueur d’impureté d’une impureté inconnue suspectée

Figure 4. Spectre UV/ VIS extrait de la préparation du marqueur d’impuretés

À ce stade, le spectre UV/VIS extrait pour l’impureté inconnue représentée à la Figure 2 a été comparé au spectre UV/VIS représenté à la Figure 4 pour l’impureté connue. L’impureté inconnue et l’impureté connue présentaient un profil UV/VIS similaire, les deux spectres contenant des maxima UV primaires compris entre 261 nm et 263 nm.

Il est noté que le maximum UV secondaire de la figure 2 est dû à une résolution non-ligne de base entre l’impureté et l’actif. Avec le temps de rétention, cela confirme l’identité de l’impureté dans la préparation de l’échantillon.

Il s’agit d’un exemple très simple et direct de la façon dont la détection par matrice de diodes (DAD) peut être utilisée pour identifier des pics inconnus lorsqu’ils sont observés en chromatographie.

Junior Mizell gère une équipe de chefs de groupe responsable de la prestation de services de laboratoire d’analyse pour les clients des Services contractuels de Métriques. Entre autres fonctions, il examine et approuve les présentations réglementaires; examine les spécifications, la validation de la méthodologie, les essais de stabilité, les enquêtes analytiques et les rapports de mise en circulation des matières premières et en cours de fabrication, des ingrédients pharmaceutiques actifs et des produits finis; et examine et approuve les protocoles et les rapports de validation des méthodes. Un membre de l’American Chemical Society et de l’AAPS, M. Mizell a rejoint Metrics en 1995 après avoir travaillé chez Burroughs Wellcome, qui fait maintenant partie de GSK. Il est titulaire d’un baccalauréat science sciences en chimie de l’Université East Carolina.