dióda-tömb detektálás használható a kromatográfiában megfigyelt ismeretlen csúcsok azonosítására

Jerry “Junior” Mizell
társigazgató, analitikai szolgáltatások

dióda-tömb detektálás (DAD) vagy fotodióda-tömb detektálás (PDA) egy analitikai technika, amely felhasználható az analit tisztaságának meghatározására vagy a kapcsolódó szennyeződések csúcsának eluálására egy HPLC elválasztás során.

a DAD használatát a módszerspecifitás bizonyítására a nemzetközi harmonizációs Tanács (ich) Q2(R1) iránymutatása engedélyezi.

a dióda tömb detektor ugyanazokat a működési elveket használja, mint a változó hullámhosszú detektor (VWD). A diódák tömbje azonban lehetővé teszi az egyidejű megszerzést a hullámhossz tartományában, nem csak egyetlen hullámhosszon. A kromatográfiás elválasztással együtt alkalmazott spektrális akvizíció olyan technika, amely lehetővé teszi az elemző számára, hogy több spektrumot gyűjtsön egy kromatográfiás csúcson. Miután ezeket a spektrumokat összegyűjtötték egy HPLC-elemzésből, felhasználhatók a spektrális csúcs tisztaságának matematikai értékelésére és a lehetséges azonosításra.

egy rutin mintaelemzés során a mintaelőkészítés kromatográfiájában körülbelül 52 percen belül Szennyeződési csúcsot figyeltek meg. Ennek a csúcsnak hasonló retenciós ideje volt, mint egy feltételezett degradánsnak, és megkezdődött a pozitív azonosítási elemzés a DAD használatával. Annak meghatározása érdekében, hogy mi volt az ismeretlen szennyeződés, a dióda tömb detektálását alkalmazó validált stabilitásjelző módszerrel elemeztük a minta-és szennyeződésjelző oldatokat. Az összegyűjtött spektrális adatokból kísérletet tettek a minta előkészítése során megfigyelt szennyeződés azonosítására.

a mintakészítmény és a kivont UV/VIS spektrumok kromatogramját az 1., illetve a 2. ábra mutatja. A szennyezőanyag-készítmény és az extrahált UV/VIS spektrumok kromatogramja a 3., illetve a 4. ábrán látható.

1.ábra. Szennyeződést tartalmazó mintakészítmény kromatogramja 52 percen belül

2. ábra. Extrahált UV spektrumok az ábrán látható kromatográfiás csúcsokhoz 1

3. ábra. Ismeretlen szennyeződés gyanújának előkészítése

4. ábra. A szennyeződésjelző készítmény extrahált UV / VIS spektruma

ezen a ponton a 2. ábrán bemutatott ismeretlen szennyeződés kivont UV/VIS spektrumát összehasonlítottuk az ismert szennyeződés 4.ábrán bemutatott UV/VIS spektrumával. Mind az ismeretlen, mind az ismert szennyeződés hasonló UV/VIS profilt mutatott, mindkét spektrum primer UV maximumot tartalmazott a 261-263 nm tartományban.

megjegyzendő, hogy a 2.ábrán látható másodlagos UV-maximum a szennyeződés és az aktív közötti nem kiindulási felbontásnak tudható be. A retenciós idővel együtt ez megerősíti a szennyeződés azonosságát a minta előkészítésében.

ez egy nagyon egyszerű és egyértelmű példa arra, hogy a dióda-tömb detektálás (DAD) hogyan használható ismeretlen csúcsok azonosítására kromatográfiában.

Junior Mizell csoportvezetőkből álló csoportot irányít, amely analitikai laboratóriumi szolgáltatásokat végez a metrikák Szerződéses szolgáltatási ügyfelei számára. Egyéb feladatai között felülvizsgálja és jóváhagyja a szabályozási beadványokat; felülvizsgálja a specifikációkat, a módszertan validálását, a stabilitási teszteket, az analitikai vizsgálatokat és a kibocsátási jelentéseket a nyers és a folyamatban lévő anyagok, a hatóanyagok és a késztermékek tekintetében; valamint felülvizsgálja és jóváhagyja a módszer validálási protokolljait és jelentéseit. Az American Chemical Society és az AAPS tagja, Mr. Mizell 1995-ben csatlakozott a Metricshoz, miután a Burroughs Wellcome-nál dolgozott, amely ma a GSK része. A Kelet-Karolinai Egyetemen kémiai diplomát szerzett.