Diodi può essere utilizzato per identificare i picchi sconosciuti osservato in cromatografia

Da Jerry “Junior” Mizell
Direttore Associato, Servizi Analitici

di Diodi (DAD) o Fotodiodo-Rilevamento di Matrice (PDA) è una tecnica analitica che può essere utilizzato per determinare la purezza di un analita o relative impurità picco di eluizione durante una separazione mediante HPLC.

L’uso del DAD per dimostrare la specificità del metodo è consentito dalla linea guida Q2 (R1) del Consiglio internazionale per l’armonizzazione(ICH).

Il rivelatore a matrice di diodi utilizza gli stessi principi di funzionamento di un rivelatore a lunghezza d’onda variabile (VWD). Tuttavia, la matrice dei diodi permette l’acquisizione simultanea attraverso una gamma di lunghezze d’onda, piuttosto che appena uno singolo. L’acquisizione spettrale utilizzata in combinazione con una separazione cromatografica è una tecnica che consente all’analista di raccogliere più spettri attraverso un picco cromatografico. Una volta che questi spettri sono stati raccolti da un’analisi HPLC, possono essere utilizzati per eseguire una valutazione della purezza del picco spettrale matematicamente e possibile identificazione.

Durante un’analisi di routine del campione, un picco di impurità eluendo a circa 52 minuti è stato osservato in cromatografia per una preparazione del campione. Questo picco ha avuto un tempo di ritenzione simile di un sospetto degradante e analisi di identificazione positiva utilizzando PAPÀ è stato iniziato. Al fine di determinare quale fosse l’impurità sconosciuta, sono state analizzate soluzioni di campioni e marcatori di impurità utilizzando il metodo di indicazione della stabilità convalidato che utilizza il rilevamento di array di diodi. Dai dati spettrali raccolti, sarebbe stato fatto un tentativo di identificare l’impurità osservata nella preparazione del campione.

Un cromatogramma della preparazione del campione e degli spettri UV/VIS estratti sono mostrati rispettivamente nelle figure 1 e 2. Un cromatogramma del preparato di impurità e degli spettri UV/VIS estratti sono mostrati rispettivamente nelle figure 3 e 4.

Figura 1. Cromatogramma della preparazione del campione contenente impurità a 52 minuti

Figura 2. Spettri UV estratti per picchi cromatografici mostrati in Figura 1

Figura 3. Marcatore di impurità preparazione di impurità sospette sconosciute

Figura 4. Spettro UV/VIS estratto della preparazione del marcatore di impurità

A questo punto, lo spettro UV/VIS estratto per l’impurità sconosciuta mostrata in Figura 2 è stato confrontato con lo spettro UV/VIS mostrato in Figura 4 per l’impurità nota. Sia l’impurità sconosciuta che l’impurità nota mostravano un profilo UV/VIS simile con entrambi gli spettri contenenti massimi UV primari nell’intervallo da 261 nm a 263 nm.

Si nota che il massimo UV secondario nella Figura 2 è dovuto alla risoluzione non basale tra l’impurità e l’attivo. Insieme al tempo di ritenzione, ciò conferma l’identità dell’impurità nella preparazione del campione.

Questo è un esempio molto semplice e diretto di come Diode-Array Detection (DAD) può essere utilizzato per identificare picchi sconosciuti quando osservato in cromatografia.

Junior Mizell gestisce un team di leader di gruppo responsabili della conduzione di servizi di laboratorio analitici per i clienti di Metrics Contract Services. Tra gli altri compiti, esamina e approva le osservazioni normative; esamina le specifiche, la convalida della metodologia, i test di stabilità, le indagini analitiche e i rapporti di rilascio per i materiali grezzi e in-process, gli ingredienti farmaceutici attivi e i prodotti finiti; e rivede e approva i protocolli e i rapporti di convalida del metodo. Un membro dell’American Chemical Society e dell’AAPS, il sig. Mizell è entrato a far parte di Metrics nel 1995 dopo aver lavorato presso Burroughs Wellcome, ora parte di GSK. Ha conseguito un bachelor of science in chimica presso la East Carolina University.