La detección de Matrices de Diodos se puede usar para identificar picos desconocidos observados en cromatografía

Por Jerry “Junior” Mizell
Director Asociado de Servicios Analíticos

La Detección de Matrices de Diodos (DAD) o Detección de Matrices de Fotodiodos (PDA) es una técnica analítica que se puede usar para determinar la pureza de un analito o la liberación de picos de impurezas relacionadas durante una separación por HPLC.

El uso de DAD para demostrar la especificidad del método está permitido por la directriz Q2 (R1) del Consejo Internacional de Armonización(ICH).

El detector de matriz de diodos utiliza los mismos principios de funcionamiento que un detector de longitud de onda variable (VWD). Sin embargo, la matriz de diodos permite la adquisición simultánea a través de un rango de longitudes de onda, en lugar de una sola. La adquisición espectral utilizada junto con una separación cromatográfica es una técnica que permite al analista recopilar múltiples espectros a través de un pico cromatográfico. Una vez que estos espectros se han recogido de un análisis de HPLC, se pueden usar para realizar una evaluación de la pureza espectral máxima matemáticamente y la posible identificación.

Durante un análisis rutinario de muestras, se observó un pico de liberación de impurezas a los 52 minutos aproximadamente en la cromatografía para una preparación de muestras. Este pico tuvo un tiempo de retención similar de un degradante sospechoso y se inició un análisis de identificación positiva utilizando DAD. Con el fin de determinar cuál era la impureza desconocida, se analizaron soluciones de marcadores de muestras e impurezas utilizando el método de indicación de estabilidad validado que emplea Detección de Matriz de Diodos. A partir de los datos espectrales recogidos, se iba a intentar identificar la impureza observada en la preparación de la muestra.

En las figuras 1 y 2, respectivamente, se muestra un cromatograma de la preparación de la muestra y de los espectros UV/VIS extraídos. En las figuras 3 y 4, respectivamente, se muestra un cromatograma de la preparación de impurezas y los espectros UV/VIS extraídos.

Figura 1. Cromatograma de preparación de muestras con impurezas a los 52 minutos

Gráfico 2 Espectros UV extraídos para picos cromatográficos que se muestran en la Figura 1

Gráfico 3 Preparación de marcadores de impurezas de impurezas desconocidas sospechosas

Gráfico 4 Espectro UV/VIS extraído de la preparación de marcadores de impurezas

En este punto, el espectro UV/VIS extraído para la impureza desconocida que se muestra en la Figura 2 se comparó con el espectro UV/VIS que se muestra en la Figura 4 para la impureza conocida. Tanto la impureza desconocida como la impureza conocida mostraron un perfil UV / VIS similar con ambos espectros que contenían máximos UV primarios en el rango de 261 nm a 263 nm.

Se observa que el máximo UV secundario de la figura 2 se debe a la resolución no basal entre la impureza y el activo. Junto con el tiempo de retención, esto confirma la identidad de la impureza en la preparación de la muestra.

Este es un ejemplo muy simple y directo de cómo se puede usar la Detección de matrices de Diodos (DAD) para identificar picos desconocidos cuando se observan en cromatografía.

Junior Mizell gestiona un equipo de líderes de grupo responsables de realizar servicios de laboratorio analítico para clientes de Servicios de Contrato de Métricas. Entre otras funciones, revisa y aprueba presentaciones reglamentarias; revisa especificaciones, validación de metodologías, pruebas de estabilidad, investigaciones analíticas e informes de liberación de materiales en bruto y en proceso, ingredientes farmacéuticos activos y productos terminados; y revisa y aprueba protocolos e informes de validación de métodos. Miembro de la American Chemical Society y de la AAPS, el Sr. Mizell se unió a Metrics en 1995 después de trabajar en Burroughs Wellcome, ahora parte de GSK. Tiene una licenciatura en ciencias en química de la Universidad de Carolina del Este.