Diode-Array Deteksjon kan brukes til å identifisere ukjente topper observert i kromatografi

Av Jerry “Junior” Mizell
Associate Director, Analytical Services

Diode-Array Detection (DAD) eller Photodiode-Array Detection (PDA) Er en analytisk teknikk som kan brukes til å bestemme renheten av en analytt eller relatert urenhet peak eluting under EN HPLC separasjon.

BRUK AV DAD for å demonstrere metodespesifisitet er tillatt av international Council For Harmonization (Ich) guideline Q2(R1).

diode array detektoren bruker de samme prinsippene for drift som en variabel bølgelengde detektor (VWD). Imidlertid muliggjør rekken av dioder samtidig oppkjøp over en rekke bølgelengder, i stedet for bare en enkelt. Spektraloppkjøp brukt i forbindelse med en kromatografisk separasjon er en teknikk som gjør det mulig for analytikeren å samle flere spektra over en kromatografisk topp. Når disse spektrene er samlet inn fra EN hplc-analyse, kan de brukes til å utføre en vurdering av spektral topprenhet matematisk og mulig identifikasjon.

under en rutinemessig prøveanalyse ble det observert en urenhetstopp eluering på omtrent 52 minutter i kromatografi for en prøvepreparering. Denne toppen hadde en lignende retensjonstid for en mistenkt nedbrytende og positiv identifikasjonsanalyse ved BRUK AV DAD ble påbegynt. For å bestemme hva den ukjente urenheten var, ble prøve-og urenhetsmarkørløsninger analysert ved hjelp av den validerte stabilitetsindikeringsmetoden som bruker Diode Array Deteksjon. Fra spektrale data samlet, ble det forsøkt å identifisere urenheten observert i prøvepreparatet.

et kromatogram av prøveprepareringen og ekstraherte UV/VIS-spektra er vist i Henholdsvis Figur 1 og 2. Et kromatogram av urenhetspreparatet og ekstraherte UV / VIS-spektra er vist i Henholdsvis Figur 3 og 4.

Figur 1. Kromatogram av prøvepreparering som inneholder urenhet ved 52 minutter

Figur 2. Ekstraherte UV-spektra for kromatografiske topper vist I Figur 1

Figur 3. Klargjøring av mistenkt ukjent urenhet

Figur 4. Ekstrahert UV / VIS spektrum av urenhetsmarkør forberedelse

PÅ dette tidspunktet ble det ekstraherte UV / VIS-spektret for den ukjente urenheten vist i Figur 2 sammenlignet MED UV / VIS-spektret vist i Figur 4 for den kjente urenheten. Både den ukjente urenheten og den kjente urenheten viste en lignende UV / VIS-profil med begge spektrene som inneholdt primære UV-maksima i 261 nm til 263 nm-området.

det bemerkes at det sekundære UV-maksimumet I Figur 2 skyldes ikke-baseline oppløsning mellom urenheten og den aktive. Sammen med retensjonstid bekrefter dette identiteten til urenheten i prøvepreparatet.

Dette er et veldig enkelt og greit eksempel på Hvordan DIODE-Array Detection (DAD) kan brukes til å identifisere ukjente topper når det observeres i kromatografi.

Junior Mizell leder et team av gruppeledere som er ansvarlige for å gjennomføre analytiske laboratorietjenester for Metrics Contract Services-klienter. Blant annet gjennomgår og godkjenner han regulatoriske innleveringer; gjennomgår spesifikasjoner, metodevalidering, stabilitetstesting, analytiske undersøkelser og utgivelsesrapporter for rå-og prosessmaterialer, aktive farmasøytiske ingredienser og ferdige produkter; og gjennomgår og godkjenner metodevalideringsprotokoller og rapporter. Et medlem Av American Chemical Society Og AAPS, Mr. Mizell begynte I Metrics i 1995 etter å ha jobbet Hos Burroughs Wellcome, nå EN DEL AV GSK. Han har en bachelor of science grad i kjemi Fra East Carolina University.