Diode-Array Detection can be used to identify unknown pieken observed in chromatography

By Jerry “Junior” Mizell
Associate Director, Analytical Services

Diode-Array Detection (DAD) or Photodiode-Array Detection (PDA) is een analytische techniek die kan worden gebruikt om de zuiverheid van een analyt of gerelateerde onzuiverheid piek eluting tijdens een HPLC scheiding te bepalen.

het gebruik van DAD om de specificiteit van de methode aan te tonen is toegestaan door richtsnoer Q2 (R1) van de Internationale Raad voor Harmonisatie(ich).

de diode-arraydetector gebruikt dezelfde werkingsprincipes als een detector met variabele golflengte (VWD). Echter, de array van diodes maakt gelijktijdige acquisitie over een bereik van golflengten, in plaats van slechts een enkele. De spectrale aanwinst die samen met een chromatografische scheiding wordt gebruikt is een techniek die de analist toestaat om veelvoudige spectra over een chromatografische piek te verzamelen. Zodra deze spectra uit een HPLC-analyse zijn verzameld, kunnen zij worden gebruikt om een beoordeling van spectrale piekzuiverheid wiskundig en mogelijke identificatie uit te voeren.

tijdens een routinematige monsteranalyse werd in chromatografie bij een monstervoorbereiding een piek-eluting van onzuiverheden waargenomen na ongeveer 52 minuten. Deze piek had een soortgelijke retentietijd van een verdachte degradant en positieve identificatie analyse met behulp van DAD was begonnen. Om te bepalen wat de onbekende onzuiverheid was, werden de monster-en onzuiverheidsmarkeroplossingen geanalyseerd met behulp van de gevalideerde stabiliteitsindicatiemethode waarbij gebruik werd gemaakt van diode-Array-detectie. Uit verzamelde spectrale gegevens zou een poging worden gedaan om de onzuiverheid te identificeren die in de monstervoorbereiding wordt waargenomen.

een chromatogram van de monstervoorbereiding en geëxtraheerde UV/VIS-spectra zijn weergegeven in respectievelijk figuur 1 en 2. Een chromatogram van het onzuiverheidpreparaat en geëxtraheerde UV/VIS-spectra zijn weergegeven in respectievelijk de figuren 3 en 4.

figuur 1. Chromatogram van monstervoorbereiding met onzuiverheid na 52 minuten

Figuur 2. Geëxtraheerde UV-spectra voor chromatografische pieken weergegeven in Figuur 1

Figuur 3. Onzuiverheid marker bereiding van verdachte Onbekende onzuiverheid

Figuur 4. Geëxtraheerd UV / VIS-spectrum van het preparaat van onzuiverheidsmarkers

op dit punt werd het geëxtraheerde UV/VIS-spectrum voor de onbekende onzuiverheid weergegeven in Figuur 2 vergeleken met het UV/VIS-spectrum weergegeven in Figuur 4 voor de bekende onzuiverheid. Zowel de onbekende onzuiverheid als de bekende onzuiverheid vertoonden een vergelijkbaar UV / VIS-profiel met beide spectra met primaire UV-maxima in het bereik van 261 nm tot 263 nm.

opgemerkt wordt dat het secundaire UV-maximum in Figuur 2 te wijten is aan het niet-baseline resolutie tussen de onzuiverheid en de actieve. Samen met behoudtijd, bevestigt dit de identiteit van de onzuiverheid in de steekproefvoorbereiding.

dit is een zeer eenvoudig en duidelijk voorbeeld van hoe Diode-Array detectie (DAD) kan worden gebruikt om onbekende pieken te identificeren wanneer waargenomen in chromatografie.Junior Mizell leidt een team van groepsleiders dat verantwoordelijk is voor het uitvoeren van analytische laboratoriumdiensten voor Metrics Contract Services klanten. Onder andere taken, hij beoordeelt en keurt regulatory inzendingen; reviews SPECIFICATIES, methodologie validatie, stabiliteit testen, analytisch onderzoek en release rapporten voor ruwe en in-process materialen, Actieve Farmaceutische Ingrediënten en afgewerkte producten; en reviews en keurt methode validatie protocollen en rapporten. Lid van de American Chemical Society en AAPS, Mr. Mizell werd lid van Metrics in 1995 na het werken bij Burroughs Wellcome, nu onderdeel van GSK. Hij heeft een bachelor of science graad in scheikunde aan de East Carolina University.