Detekcja macierzy diodowej może być używana do identyfikacji nieznanych pików obserwowanych w chromatografii

Jerry “Junior” Mizell
Associate Director, Analytical Services

Detekcja macierzy diodowej (DAD) lub Detekcja macierzy Fotodiodowej (PDA) jest techniką analityczną, która może być wykorzystana do określenia czystości analitu lub związanego z nim piku zanieczyszczeń eluującego się podczas separacji HPLC.

wykorzystanie DAD do wykazania specyficzności metody jest dozwolone przez Międzynarodową Radę harmonizacji (ICH) wytyczna Q2(R1).

detektor diodowy wykorzystuje te same zasady działania CO detektor o zmiennej długości fali (VWD). Jednak tablica diod umożliwia jednoczesną akwizycję w zakresie długości fal, a nie tylko jednej. Akwizycja spektralna stosowana w połączeniu z separacją chromatograficzną jest techniką, która pozwala analitykowi zebrać wiele widm w piku chromatograficznym. Po zebraniu tych widm z analizy HPLC można je wykorzystać do przeprowadzenia oceny spektralnej czystości piku matematycznie i możliwej identyfikacji.

podczas rutynowej analizy próbki, w chromatografii do przygotowania próbki zaobserwowano pik zanieczyszczeń eluujący się po około 52 minutach. Ten szczyt miał podobny czas retencji podejrzenia degradacji i rozpoczęto pozytywną analizę identyfikacji przy użyciu DAD. W celu określenia nieznanego zanieczyszczenia analizowano próbki i roztwory markerów zanieczyszczeń przy użyciu zwalidowanej metody wskazującej stabilność wykorzystującej detekcję macierzy diodowych. Na podstawie zebranych danych spektralnych podjęto próbę identyfikacji zanieczyszczeń obserwowanych w preparacie próbki.

chromatogram przygotowania próbki i wyekstrahowanych widm UV/VIS przedstawiono odpowiednio na fig. 1 i 2. Chromatogram preparatu zanieczyszczeń i ekstrahowane widma UV / VIS przedstawiono odpowiednio na fig. 3 i 4.

Rysunek 1. Chromatogram przygotowania próbki zawierający zanieczyszczenia w 52 minutach

Rysunek 2. Ekstrahowane widma UV dla pików chromatograficznych pokazane na rysunku 1

Rysunek 3. Marker zanieczyszczeń przygotowanie podejrzanych nieznanych zanieczyszczeń

Rysunek 4. Wyodrębnione spektrum UV/VIS przygotowania markera zanieczyszczeń

w tym momencie wyodrębnione widmo UV / VIS dla nieznanego zanieczyszczenia pokazanego na fig. 2 porównano z widmem UV/VIS pokazanym na fig. 4 dla znanego zanieczyszczenia. Zarówno nieznane zanieczyszczenie, jak i znane zanieczyszczenie wykazywały podobny profil UV / VIS z obydwoma widmami zawierającymi pierwotne Maksima UV w zakresie 261 nm do 263 nm.

zauważono, że wtórne maksimum UV na fig.2 wynika z niezwiązanego z poziomem wyjściowym rozdzielenia między zanieczyszczeniami a aktywnymi. Wraz z czasem retencji potwierdza to tożsamość zanieczyszczeń w preparacie próbki.

jest to bardzo prosty i prosty przykład, w jaki sposób wykrywanie Diod (DAD) może być używane do identyfikacji nieznanych pików podczas obserwacji w chromatografii.

Junior Mizell zarządza zespołem liderów grupy odpowiedzialnych za prowadzenie usług laboratorium analitycznego dla klientów Metrics Contract Services. Wśród innych obowiązków, on przegląda i zatwierdza zgłoszenia regulacyjne; przeglądy specyfikacji, Walidacja metodologii, badania stabilności, badania analityczne i raporty uwalniania surowców i materiałów w trakcie procesu, aktywnych składników farmaceutycznych i gotowych produktów; i przegląda i zatwierdza protokoły walidacji metod i raporty. Członek American Chemical Society i AAPS, Mr. Mizell dołączył do Metrics w 1995 roku po pracy w Burroughs Wellcome, obecnie część GSK. Posiada tytuł bachelor ‘ s of science w dziedzinie chemii na East Carolina University.