Diodo-Matriz de Detecção pode ser usado para identificar desconhecido picos observados em cromatografia

Por Jerry “Junior” Mizell
Diretora adjunta de Serviços Analíticos

Diodo-Matriz de Detecção (PAI) ou Fotodíodo-Matriz de Detecção (PDA) é uma técnica analítica que pode ser usada para determinar a pureza de uma substância ou relacionados com a impureza de pico de eluição durante uma separação por HPLC.

o uso do DAD para demonstrar a especificidade do método é permitido pela diretriz Q2 (R1) do Conselho Internacional de harmonização(ICH).

o detector de matriz de diodo usa os mesmos princípios de operação que um detector de comprimento de onda variável (VWD). No entanto, a matriz de diodos permite a aquisição simultânea em uma variedade de comprimentos de onda, em vez de apenas um único. A aquisição espectral usada em conjunto com uma separação cromatográfica é uma técnica que permite ao analista coletar múltiplos espectros em um pico cromatográfico. Uma vez que esses espectros foram coletados a partir de uma análise HPLC, eles podem ser usados para realizar uma avaliação da pureza do Pico espectral matematicamente e possível identificação.

durante uma análise rotineira da amostra, um pico de impureza eluindo em aproximadamente 52 minutos foi observado na cromatografia para uma preparação da amostra. Este pico teve um tempo de retenção semelhante de uma suspeita de degradante e análise de identificação positiva usando DAD foi iniciada. A fim de determinar qual era a impureza desconhecida, as soluções de marcadores de amostra e impureza foram analisadas usando o método de indicação de estabilidade validado empregando detecção de matriz de diodo. A partir dos dados espectrais coletados, foi feita uma tentativa de identificar a impureza observada na preparação da amostra.

um cromatograma da preparação da amostra e espectros UV/VIS extraídos são mostrados nas Figuras 1 e 2, respectivamente. Um cromatograma da preparação de impurezas e espectros UV/VIS extraídos são mostrados nas Figuras 3 e 4, respectivamente.

Figura 1. Cromatograma da preparação da amostra que contém a impureza em 52 minutos

Figura 2. Espectros UV extraídos para picos cromatográficos mostrados na Figura 1

Figura 3. Preparação do marcador de impureza de suspeita de impureza desconhecida

Figura 4. Espectro UV/VIS extraído da preparação do marcador da impureza

neste ponto, o espectro UV/VIS extraído para a impureza desconhecida mostrada na Figura 2 foi comparado ao espectro UV/VIS mostrado na Figura 4 para a impureza conhecida. Tanto a impureza desconhecida quanto a impureza conhecida exibiram um perfil UV/VIS semelhante com ambos os espectros contendo máximos UV primários na faixa de 261 nm a 263 nm.

observa-se que o máximo secundário de UV na Figura 2 é devido à resolução não basal entre a impureza e o ativo. Juntamente com o tempo de retenção, isso confirma a identidade da impureza na preparação da amostra.

este é um exemplo muito simples e direto de como a detecção de matriz de diodo (DAD) pode ser usada para identificar picos desconhecidos quando observados na cromatografia.

Junior Mizell gerencia uma equipe de Líderes de Grupo responsáveis pela realização de serviços de laboratório analítico para clientes de Serviços de contrato de métricas. Entre outras funções, ele revisa e aprova submissões regulatórias; revisa ESPECIFICAÇÕES, validação de metodologia, testes de estabilidade, investigações analíticas e divulga relatórios para materiais crus e em processo, ingredientes farmacêuticos ativos e produtos acabados; e revisa e aprova protocolos e relatórios de validação de método. Membro da American Chemical Society e da AAPS, Sr. Mizell ingressou na Metrics em 1995 depois de trabalhar na Burroughs Wellcome, agora parte da GSK. Ele é bacharel em Ciências em Química pela East Carolina University.