Leitor de microplacas de absorvância

se você estiver no mercado para um novo leitor de microplacas de absorvância, existem alguns fatores a serem levados em consideração, pois o desempenho do instrumento pode afetar significativamente a qualidade de seus dados de pesquisa.

seleção de comprimento de onda
uma capacidade de seleção de comprimento de onda é obrigatória para um leitor de microplacas de absorvância e depende do tipo de detectores que são usados.

dois tipos diferentes de detectores são comumente usados: Tubos fotomultiplicadores (PMTs) ou espectrômetros de dispositivo acoplado à carga (CCD).

o leitor de microplacas baseado em PMT requer uma ferramenta de seleção de comprimento de onda entre a fonte de luz e a amostra. Filtros ópticos ou monocromadores selecionam o comprimento de onda desejado antes que a luz seja enviada para a amostra. Desta forma, apenas a luz em um comprimento de onda desejado é transmitida através da amostra, atinge o PMT e é quantificada.

para escanear espectros ou uma faixa de comprimentos de onda, o leitor de microplacas baseado em PMT requer um monocromador. Isto seleciona os comprimentos de onda desejados e mede-os sequencialmente em cima do movimento mecânico. Para medições de vários comprimentos de onda discretos, são necessárias várias medições únicas com filtros diferentes ou uma varredura monocromática.

o leitor de microplacas baseado em espectrômetro CCD não requer uma ferramenta de seleção de comprimento de onda. O espectrômetro separa os diferentes comprimentos de onda presentes na luz transmitida através da amostra, pois estes são direcionados para o detector CCD. Isso captura a intensidade de todos os comprimentos de onda de uma só vez. Desta forma, espectros, comprimentos de onda discretos simples ou múltiplos podem ser adquiridos em um curto período de tempo.

se sua aplicação precisar de aquisição espectral, os espectrômetros CCD são significativamente mais rápidos que os monocromadores, pois a varredura espectral mecânica não é necessária.

os instrumentos BMG LABTECH estão equipados com um espectrômetro UV/vis para medições de absorvância. Isso captura um espectro completo de 220 a 1000 nm em menos de um segundo/poço.

formatos de microplacas compatíveis
comumente em aplicações de Ciências da vida, ensaios básicos de absorvância como ELISA são medidos em microplacas de 96 poços. No entanto, se você tiver várias amostras e/ou desejar economizar reagentes ou tempo preciosos, 384 e 1536 formatos de poço também podem ser usados. Apenas certifique-se de que seu leitor de microplacas absorbance de escolha também é capaz de ler o formato de microplaca que você planeja usar.

agitação e incubação
ao procurar um leitor de microplacas de absorvância, você deve considerar a natureza de sua pesquisa e do ensaio que deseja executar. Geralmente, agitação e incubação são duas características importantes. A incubação é extremamente importante ao executar ensaios enzimáticos a temperaturas estáveis, por exemplo, 37° C. Várias opções de agitação permitem uma mistura adequada das amostras. Para aplicações como ensaios de crescimento celular em bactérias ou leveduras (OD600), a agitação é crucial para uma boa oxigenação e consequente replicação celular rápida.

compatibilidade com cubetas
tradicionalmente, as medições de absorvância foram realizadas em cubetas com um comprimento de caminho normalizado de 1 cm. Em microplacas, o comprimento do caminho muda dependendo do volume e do formato da placa. Se as soluções aquosas são medidas, a medida da microplaca pode ser normalizada usando a correção do comprimento do trajeto do água-pico. Se, apesar dessa opção, para sua pesquisa, você ainda precisar ocasionalmente de amostras de medição em cubetas, certifique-se de que o leitor de microplacas de sua escolha tenha uma porta de cubeta integrada como o SPECTROstar Nano ou adaptadores de placa para medir cubetas horizontalmente como a placa LVis.

Software para redução de dados
Geralmente, o software que executa o leitor de microplacas é uma parte muito subestimada do pacote. Para algum leitor, o software controla apenas o processo de medição e fornece uma saída de dados brutos. Em outros casos, pode realizar análises complexas de dados.

um software abrangente, fácil de usar e flexível pode facilitar a vida, simplificar a detecção e a análise de dados para que você possa tirar o máximo proveito do seu instrumento.

os recursos de cálculo mais úteis incluem subtração automática em branco, cálculo automático das concentrações da amostra com base em curvas padrão para ensaios ELISA ou na Lei Beer-Lambert, proporções 260/280, correções do comprimento do caminho e constantes enzimáticas, como Km e Vmax.

no pacote de software BMG LABTECH, os ensaios mais comuns têm protocolos específicos de ensaio de execução rápida predefinidos e modelos de redução de dados dedicados. Por meio dessas soluções dedicadas, a aquisição e análise de dados são realizadas com um único clique do mouse, permitindo que os pesquisadores realizem experimentos de forma rápida e fácil.