Diode-Array Detection poate fi utilizat pentru a identifica vârfuri necunoscute observate în cromatografie

de Jerry “Junior” Mizell
director asociat, servicii analitice

Diode-Array Detection (DAD) sau Photodiode-Array Detection (PDA) este o tehnică analitică care poate fi utilizată pentru a determina puritatea unui analit sau a unui vârf de impuritate asociat în timpul unei separări HPLC.

utilizarea DAD pentru a demonstra specificitatea metodei este permisă de orientarea Q2 (R1) a Consiliului Internațional pentru Armonizare(ICH).

detectorul cu matrice de diode utilizează aceleași principii de funcționare ca un detector cu lungime de undă variabilă (VWD). Cu toate acestea, gama de diode permite achiziția simultană pe o gamă de lungimi de undă, mai degrabă decât doar una singură. Achiziția spectrală utilizată împreună cu o separare cromatografică este o tehnică care permite analistului să colecteze mai multe spectre pe un vârf cromatografic. Odată ce aceste spectre au fost colectate dintr-o analiză HPLC, ele pot fi utilizate pentru a efectua o evaluare matematică a purității vârfului spectral și identificarea posibilă.

în timpul unei analize de rutină a eșantionului, a fost observat un vârf de impuritate eluat la aproximativ 52 de minute în cromatografie pentru un preparat de probă. Acest vârf a avut un timp de retenție similar cu un degradant suspectat și a început analiza de identificare pozitivă folosind tata. Pentru a determina care a fost impuritatea necunoscută, soluțiile de marker de probă și impuritate au fost analizate folosind metoda validată de indicare a stabilității care utilizează detectarea matricei de Diode. Din datele spectrale colectate, urma să se facă o încercare de identificare a impurității observate în preparatul probei.

o cromatogramă a preparatului probei și spectrele UV/VIS extrase sunt prezentate în Figurile 1 și, respectiv, 2. O cromatogramă a preparatului de impuritate și spectrele UV/VIS extrase sunt prezentate în figurile 3 și, respectiv, 4.

Figura 1. Cromatograma preparatului probei care conține impurități la 52 de minute

Figura 2. Spectrele UV extrase pentru vârfurile cromatografice prezentate în Figura 1

Figura 3. Marker de impuritate pregătirea impurității suspectate necunoscute

Figura 4. Spectrul UV/VIS extras de preparare a markerului de impuritate

în acest moment, spectrul UV/VIS extras pentru impuritatea necunoscută prezentat în Figura 2 a fost comparat cu spectrul UV/VIS prezentat în Figura 4 pentru impuritatea cunoscută. Atât impuritatea necunoscută, cât și impuritatea cunoscută au prezentat un profil UV/VIS similar, ambele Spectre conținând maxime UV primare în intervalul 261 nm până la 263 nm.

se remarcă faptul că maximul UV secundar din Figura 2 se datorează rezoluției non-inițiale între impuritate și activ. Împreună cu timpul de retenție, acest lucru confirmă identitatea impurității în preparatul probei.

acesta este un exemplu foarte simplu și direct al modului în care detectarea diodelor (DAD) poate fi utilizată pentru a identifica vârfuri necunoscute atunci când sunt observate în cromatografie.

Junior Mizell gestionează o echipă de lideri de grup responsabili cu efectuarea de servicii de laborator analitic pentru clienții Metrics Contract Services. Printre alte sarcini, el revizuiește și aprobă observațiile de reglementare; revizuiește specificațiile, validarea metodologiei, testarea stabilității, investigațiile analitice și rapoartele de lansare pentru materialele brute și în proces, ingredientele farmaceutice active și produsele finite; și revizuiește și aprobă protocoalele și rapoartele de validare a metodei. Membru al American Chemical Society și AAPS, dl. Mizell s-a alăturat Metrics în 1995 după ce a lucrat la Burroughs Wellcome, acum parte a GSK. Deține o diplomă de licență în chimie de la Universitatea din Carolina de Est.