diod-Array Detection kan användas för att identifiera okända toppar som observerats i kromatografi

av Jerry “Junior” Mizell
Associate Director, Analytical Services

diod-Array Detection (DAD) eller Photodiode-Array Detection (PDA) är en analytisk teknik som kan användas för att bestämma renheten hos en analyt eller relaterad orenhet topp eluering under en HPLC-separation.

användningen av DAD för att visa metodspecificitet tillåts av Internationella rådet för harmonisering (ich) riktlinje Q2(R1).

diodmatrisdetektorn använder samma driftsprinciper som en variabel våglängdsdetektor (VWD). Emellertid möjliggör matrisen av dioder samtidig förvärv över ett våglängdsområde, snarare än bara en enda. Spektralförvärv som används i samband med en kromatografisk separation är en teknik som gör det möjligt för analytikern att samla flera spektra över en kromatografisk topp. När dessa spektra har samlats in från en HPLC-analys kan de användas för att utföra en bedömning av spektral topprenhet matematiskt och möjlig identifiering.

under en rutinmässig provanalys observerades en orenhetstopputsläpp vid cirka 52 minuter i kromatografi för en provberedning. Denna topp hade en liknande retentionstid för en misstänkt nedbrytare och positiv identifieringsanalys med DAD påbörjades. För att bestämma vad den okända föroreningen var, analyserades prov-och föroreningsmarkörlösningar med användning av den validerade stabilitetsindikeringsmetoden som använder Diodmatrisdetektering. Från insamlade spektraldata skulle ett försök göras för att identifiera föroreningen som observerades i provberedningen.

ett kromatogram av provberedningen och extraherade UV/VIS-spektra visas i figurerna 1 respektive 2. Ett kromatogram av föroreningsberedningen och extraherade UV/VIS-spektra visas i figurerna 3 respektive 4.

Figur 1. Kromatogram av provberedning innehållande orenhet vid 52 minuter

Figur 2. Extraherade UV-spektra för kromatografiska toppar som visas i Figur 1

Figur 3. Förberedelse av misstänkt okänd förorening

Figur 4. Extraherat UV / VIS-spektrum för beredning av föroreningsmarkörer

vid denna tidpunkt jämfördes det extraherade UV/VIS-spektrumet för den okända föroreningen som visas i Figur 2 med UV/VIS-spektrumet som visas i Figur 4 för den kända föroreningen. Både den okända föroreningen och den kända föroreningen uppvisade en liknande UV / VIS-profil med båda spektra som innehöll primära UV-maxima i intervallet 261 nm till 263 nm.

det noteras att det sekundära UV-maximumet i Figur 2 beror på icke-baslinjeupplösning mellan föroreningen och den aktiva. Tillsammans med retentionstid bekräftar detta identiteten på föroreningen i provberedningen.

Detta är ett mycket enkelt och enkelt exempel på hur diod-Array Detection (DAD) kan användas för att identifiera okända toppar när de observeras i kromatografi.

Junior Mizell hanterar ett team av gruppledare som ansvarar för att utföra analytiska laboratorietjänster för Metrics kontraktstjänster. Bland annat granskar och godkänner han regulatoriska inlagor; granskar SPECIFIKATIONER, metodvalidering, stabilitetstestning, analytiska undersökningar och släpprapporter för råvaror och processmaterial, aktiva farmaceutiska ingredienser och färdiga produkter; och granskar och godkänner metodvalideringsprotokoll och rapporter. En medlem av American Chemical Society och AAPS, Herr. Mizell gick med i Metrics 1995 efter att ha arbetat på Burroughs Wellcome, nu en del av GSK. Han har en kandidatexamen i kemi från East Carolina University.