bramborový Dextrózový Agar (PDA): princip, složení, vlastnosti kolonie

Naposledy aktualizováno 17.června 2021

bramborový dextrózový agar (PDA) je univerzální bazální médium pro identifikaci, pěstování a výčet kvasinek a plísní v potravinách a mléčných výrobcích. Může být také použit pro pěstování kvasinek a plísní z klinických vzorků. Protože stimuluje sporulaci a pigmentaci, pomáhá také při kultivaci a diferenciaci patogenních a nepatogenních hub.

PDA je také užitečná pro udržování zásobních kultur určitých dermatofytů. Jako selektivní činidla lze přidat některá antibiotika nebo kyseliny, jako je chloramfenikol, kyselina vinná a chlortetracyklin.

bramborový dextrózový agar S TA (kyselina vinná) se doporučuje pro mikrobiální vyšetření potravin a mléčných výrobků. Přidání chlortetracyklinu se doporučuje pro mikrobiální výčet kvasinek a plísní z kosmetiky. Bramborový dextrózový agar s chloramfenikolem se doporučuje pro selektivní kultivaci hub ze smíšených vzorků.

princip

agar bramborové dextrózy (PDA) obsahuje dextrózu jako zdroj uhlohydrátů, který slouží jako stimulant růstu, a infuzi brambor, která poskytuje živnou základnu pro bujný růst většiny hub. Jako tuhnoucí činidlo se přidává Agar. Určené množství sterilní kyseliny vinné (10%) může být začleněno, aby se snížilo pH média na 3,5, takže je inhibován růst bakterií.

je třeba dbát na to, aby se okyselené médium nezahřívalo; zahříváním v kyselém stavu se agar hydrolyzuje, což může způsobit, že agar nebude schopen ztuhnout.

Composition of PDA

*4.0gm of potato extract is equivalent to 200gm of potato infusion

If supplement added: tartaric acid – 1.4 gm (pH-3.5 +/- 0.3 at 25°C)

Chloramphenicol – 25 mg ( pH-5.6 +/- 0.2 při 25°C)

Chlortetracyklin-40 mg

postup pro přípravu média

1. Suspendujte 39 gramů dehydratovaného média (dodávaného komerčními dodavateli) v 1000 ml destilované vody. Zahřejte k varu, aby se médium úplně rozpustilo.
2. sterilizujte autoklávováním při tlaku 15 liber (121°C) po dobu 15 minut. Před dávkováním dobře promíchejte.
3. při specifické práci, pokud je vyžadováno pH 3,5, by mělo být médium okyseleno sterilní 10% kyselinou vinnou. Množství kyseliny potřebné pro 100 ml. sterilní, chlazené médium je přibližně 1 ml. Neohřívejte médium po přidání kyseliny.
4. pro zpracování vzorku natřete vzorek na médium sterilní inokulační smyčkou, abyste získali izolované kolonie.
5. inkubujte destičky při 25-30°C v obrácené poloze (agarovou stranou nahoru) se zvýšenou vlhkostí.
6. kultury by měly být alespoň jednou týdně vyšetřeny na růst plísní a měly by být udržovány po dobu 4 – 6 týdnů, než budou hlášeny jako negativní.

výsledek

kvasinky porostou jako krémové až bílé kolonie. Formy budou růst jako vláknité kolonie různých barev.

typická morfologie některých hub

Spočítejte počet kolonií a zvažte faktor ředění (pokud byl zkušební vzorek zředěn) při určování počtu kvasinek a/nebo plísní na gram nebo mililitr materiálu.