Potato Dextrose Agar (PDA): Principle, Composition, Colony Characteristics

laatst bijgewerkt op 17 juni 2021

Potato dextrose agar (PDA) is een basaal medium voor de identificatie, teelt en telling van gist en schimmels in levensmiddelen en zuivelproducten. Het kan ook worden gebruikt voor de teelt van gisten en schimmels van klinische specimens. Omdat het de sporulatie en pigmentatie stimuleert, helpt het ook bij het kweken en differentiëren van pathogene en niet-pathogene schimmels.

PDA is ook nuttig voor het handhaven van voorraadculturen van bepaalde dermatofyten. Bepaalde antibiotica of zuren zoals chlooramfenicol, wijnsteenzuur en chloortetracycline kunnen als selectieve agenten worden toegevoegd.

Aardappeldextroseagar met TA (wijnsteenzuur) wordt aanbevolen voor het microbieel onderzoek van levensmiddelen en zuivelproducten. Toevoeging van chloortetracycline wordt aanbevolen voor de microbiële telling van gist en schimmel uit cosmetica. Aardappeldextroseagar met chlooramfenicol wordt aanbevolen voor de selectieve teelt van schimmels uit gemengde monsters.

Principe

Potato dextrose agar (PDA) bevat dextrose als koolhydraatbron die dient als groeistimulans en aardappelinfusie die een voedingsbasis biedt voor weelderige groei van de meeste schimmels. Agar wordt toegevoegd als stollingsmiddel. Een bepaalde hoeveelheid steriel wijnsteenzuur (10%) kan worden toegevoegd om de pH van het medium te verlagen tot 3,5 zodat de bacteriegroei wordt geremd.

men dient ervoor te zorgen dat het aangezuurde medium niet opnieuw wordt verwarmd; door verhitting in zure toestand wordt de agar gehydrolyseerd waardoor de agar niet kan stollen.

Composition of PDA

*4.0gm of potato extract is equivalent to 200gm of potato infusion

If supplement added: tartaric acid – 1.4 gm (pH-3.5 +/- 0.3 at 25°C)

Chloramphenicol – 25 mg ( pH-5.6 +/- 0.2 bij 25°C)

Chloortetracycline – 40 mg

procedé for Preparation of media

1. Suspendeer 39 g gedehydrateerde media (geleverd door commerciële leveranciers) in 1000 ml gedestilleerd water. Verhit tot koken om het medium volledig op te lossen.
2. steriliseren door gedurende 15 minuten bij 121°C een autoclaaf te gebruiken. Meng goed voor het doseren.
3. bij specifieke werkzaamheden, wanneer een pH van 3,5 vereist is, moet het medium worden aangezuurd met steriel 10% wijnsteenzuur. De hoeveelheid zuur die nodig is voor 100 ml. van steriel, gekoeld medium is ongeveer 1 ml. Verhit het medium niet na toevoeging van het zuur.
4. voor de verwerking van het monster, streak het monster op het medium met een steriele inoculerende lus om geïsoleerde kolonies te verkrijgen.Incubeer de platen bij 25-30°C in omgekeerde positie (agarzijde naar boven) bij verhoogde vochtigheid.
5. culturen moeten ten minste wekelijks op schimmelgroei worden onderzocht en moeten gedurende 4-6 weken worden bewaard voordat ze als negatief worden gerapporteerd.

resultaat

gisten groeien als romige tot witte kolonies. Schimmels zullen groeien als filamenteuze kolonies van verschillende kleuren.

Typisch kolonie morfologie van sommige schimmels

Tel het aantal kolonies en houd rekening met de verdunningsfactor (indien het testmonster is verdund) bij het bepalen van het gist-en/of schimmelaantal per gram of milliliter materiaal.