Agar dekstrozy ziemniaczanej (PDA): zasada, skład, charakterystyka Kolonii

Last updated on June 17th, 2021

Agar dekstrozy ziemniaczanej (PDA) jest podstawowym podłożem ogólnego przeznaczenia do identyfikacji, uprawy i wyliczania drożdży i form w żywności i produktach mlecznych. Może być również stosowany do uprawy drożdży i pleśni z okazów klinicznych. Ponieważ stymuluje sporulację i pigmentację, pomaga również w uprawie i różnicowaniu grzybów patogennych i niepatogennych.

Kolonia grzybów w PDA źródło:Rachel Brown, University of Florida, Bugwood.org
Kolonia grzybów w PDA
źródło:Rachel Brown, University of Florida, Bugwood.org

PDA jest również przydatny do utrzymania hodowli zasobów niektórych dermatofitów. Niektóre antybiotyki lub kwasy, takie jak chloramfenikol, kwas winowy i chlortetracyklina, mogą być dodawane jako środki selektywne.

agar dekstrozy ziemniaczanej z TA (kwasem winowym) jest zalecany do badania mikrobiologicznego żywności i produktów mlecznych. Dodatek chlortetracykliny jest zalecany do mikrobiologicznego wyliczenia drożdży i pleśni z kosmetyków. Agar dekstrozy ziemniaczanej z chloramfenikolem jest zalecany do selektywnej uprawy grzybów z próbek mieszanych.

zasada

Agar dekstrozy ziemniaczanej (PDA) zawiera dekstrozę jako źródło węglowodanów, które służy jako stymulator wzrostu i napar ziemniaczany, który stanowi podstawę odżywczą dla bujnego wzrostu większości grzybów. Jako środek zestalający dodaje się Agar. Określona ilość sterylnego kwasu winowego (10%) może być włączona w celu obniżenia pH pożywki do 3,5, tak aby zahamować wzrost bakterii.

należy uważać, aby nie podgrzać zakwaszonego podłoża;ogrzewanie w stanie kwaśnym zhydrolizuje agar, co może spowodować, że agar nie będzie w stanie zestalić.

Composition of PDA

Ingredients Gm/L
Dextrose 20 g
Potato extract 4 g*
Agar 15 g

*4.0gm of potato extract is equivalent to 200gm of potato infusion

If supplement added: tartaric acid – 1.4 gm (pH-3.5 +/- 0.3 at 25°C)

Chloramphenicol – 25 mg ( pH-5.6 +/- 0.2 w temperaturze 25°C)

Chlortetracyklina – 40 mg

procedura przygotowania mediów

  1. Zawieś 39 gramów odwodnionych mediów (dostarczanych przez dostawców komercyjnych) w 1000 ml wody destylowanej. Podgrzać do wrzenia, aby całkowicie rozpuścić medium.
  2. sterylizować w autoklawie pod ciśnieniem 15 funtów (121°C) przez 15 minut. Dobrze wymieszać przed dozowaniem.
  3. w specyficznej pracy, gdy wymagane jest pH 3,5, podłoże należy zakwaszać sterylnym 10% kwasem winowym. Ilość kwasu wymagana do 100 ml. sterylnej, schłodzonej pożywki wynosi około 1 ml. Nie podgrzewać podłoża po dodaniu kwasu.
  4. w celu przetworzenia próbki należy przyłożyć próbkę do podłoża sterylną pętlą inokulacyjną w celu uzyskania izolowanych Kolonii.
  5. inkubować płytki w temperaturze 25-30°C w pozycji odwróconej (strona agaru do góry) ze zwiększoną wilgotnością.
  6. kultury powinny być badane co najmniej raz w tygodniu pod kątem wzrostu grzybów i powinny być trzymane przez 4 – 6 tygodni, zanim zostaną stwierdzone jako negatywne.

wynik

drożdże będą rosły w postaci kremowych do białych Kolonii. Pleśnie będą rosły jako nitkowate kolonie o różnych kolorach.

typowa morfologia Kolonii niektórych grzybów

Grzyby charakterystyka Kolonii
Tekstura kolor powierzchni Kolor Odwrotny Strefa sporulacja
A. candidus aksamitny gruby kremowy biały lekko kremowy promieniowo bruzdowany na rewersie umiarkowany
A.niger aksamitny biały z typowymi czarnymi zarodnikami Żółty mocno bruzdowany na rewersie ciężki
A. sulphureus aksamitny Brudnobiały z żółtymi zarodnikami w środku barwa pomarańczowa do czekoladowej lekko promieniście bruzdowany umiarkowany
A. versicolor Flokoza biały do pomarańczowego-kremowy z zielonymi zarodnikami w środku jasny pomarańczowy mocno pomarszczony na rewersie umiarkowany
Penicillium corylophilum aksamitny Ciemnozielony bezbarwny do kremowego z płytkim środkiem i promieniowo bruzdowanym podniesionym marginesem umiarkowany
P. expansum aksamitny ciemnozielony z wyraźnymi wysiękami i wyraźnym sterylnym białym marginesem Żółty promieniście bruzdowany ciężki
Penicillium spp Pudrowy oliwkowozielony ze sterylnym białym marginesem Pomarańczowy do czerwonego, pomarszczony promieniście bruzdowany ciężki
Fusarium oxysporum Floccose Magenta pink Magenta-red turning violet z koncentrycznymi strefami ciemnego i jasnoczerwonego zabarwienia biedny

policzyć liczbę kolonii i wziąć pod uwagę współczynnik rozcieńczenia (jeśli próbka badana została rozcieńczona) przy określaniu liczby drożdży i/lub pleśni na gram lub mililitr materiału.

Leave a Reply