Gélose au Dextrose de la pomme de terre (PDA): Principe, Composition, Caractéristiques des colonies

Dernière mise à jour le 17 juin 2021

La gélose au dextrose de la pomme de terre (PDA) est un milieu de base à usage général pour l’identification, la culture et le dénombrement des levures et des moisissures dans les aliments et les produits laitiers. Il peut également être utilisé pour la culture de levures et de moisissures à partir d’échantillons cliniques. Puisqu’il stimule la sporulation et la pigmentation, il aide également à cultiver et à différencier les champignons pathogènes et non pathogènes.

Le PDA est également utile pour maintenir des cultures de stock de certains dermatophytes. Certains antibiotiques ou acides comme le chloramphénicol, l’acide tartrique et la chlortétracycline peuvent être ajoutés comme agents sélectifs.

La gélose de dextrose de pomme de terre avec de l’acide tartrique (TA) est recommandée pour l’examen microbien des aliments et des produits laitiers. L’ajout de chlortétracycline est recommandé pour le dénombrement microbien des levures et des moisissures provenant des cosmétiques. La gélose de dextrose de pomme de terre au chloramphénicol est recommandée pour la culture sélective de champignons à partir d’échantillons mélangés.

Principe

La gélose de dextrose de pomme de terre (PDA) contient du dextrose comme source de glucides qui sert de stimulant de croissance et d’infusion de pomme de terre qui fournit une base nutritive pour la croissance luxuriante de la plupart des champignons. La gélose est ajoutée comme agent solidifiant. Une quantité déterminée d’acide tartrique stérile (10%) peut être incorporée pour abaisser le pH du milieu à 3,5 afin d’inhiber la croissance bactérienne.

Il faut veiller à ne pas réchauffer le milieu acidifié; le chauffage à l’état acide hydrolysera la gélose, ce qui peut rendre la gélose incapable de se solidifier.

Composition of PDA

*4.0gm of potato extract is equivalent to 200gm of potato infusion

If supplement added: tartaric acid – 1.4 gm (pH-3.5 +/- 0.3 at 25°C)

Chloramphenicol – 25 mg ( pH-5.6 +/- 0.2 à 25 °C)

Chlortétracycline – 40 mg

Procédure de préparation des milieux

1. Suspendre 39 grammes de milieux déshydratés (fournis par des fournisseurs commerciaux) dans 1000 ml d’eau distillée. Chauffer à ébullition pour dissoudre complètement le milieu.
2. Stériliser par autoclavage à 121 °C (15 lb) pendant 15 minutes. Bien mélanger avant la distribution.
3. Dans un travail spécifique, lorsque un pH de 3,5 est requis, le milieu doit être acidifié avec de l’acide tartrique stérile à 10%. La quantité d’acide requise pour 100 ml. de milieu stérile refroidi est d’environ 1 ml. Ne pas chauffer le milieu après addition de l’acide.
4. Pour le traitement de l’échantillon, strie l’échantillon sur le milieu avec une boucle d’inoculation stérile afin d’obtenir des colonies isolées.
5. Incuber les plaques à 25 – 30 °C en position inversée (côté gélose vers le haut) avec une humidité accrue.
6. Les cultures doivent être examinées au moins une fois par semaine pour détecter la croissance fongique et doivent être conservées pendant 4 à 6 semaines avant d’être signalées comme négatives.

Résultat

Les levures deviendront des colonies crémeuses à blanches. Les moisissures se développeront sous forme de colonies filamenteuses de différentes couleurs.

Morphologie typique des colonies de certains champignons

Compter le nombre de colonies et tenir compte du facteur de dilution (si l’échantillon d’essai a été dilué) pour déterminer le nombre de levures et/ou de moisissures par gramme ou millilitre de matière.