Potato Dextrose Agar (PDA): Principio, Composizione, Colony Characteristics

Ultimo aggiornamento giugno 17th, 2021

Potato dextrose agar (PDA) è un terreno basale general-purpose per l’identificazione, la coltivazione e l’enumerazione di lieviti e muffe in alimenti e prodotti lattiero-caseari. Può essere utilizzato anche per la coltivazione di lieviti e muffe da campioni clinici. Poiché stimola la sporulazione e la pigmentazione, aiuta anche a coltivare e differenziare i funghi patogeni e non patogeni.

PDA è anche utile per mantenere stock culture di alcuni dermatofiti. Alcuni antibiotici o acidi come cloramfenicolo, acido tartarico e clortetraciclina possono essere aggiunti come agenti selettivi.

L’agar di destrosio di patate con TA (acido tartarico) è raccomandato per l’esame microbico di alimenti e latticini. L’aggiunta di clortetraciclina è raccomandata per l’enumerazione microbica di lievito e muffe dai cosmetici. L’agar di destrosio di patate con cloramfenicolo è raccomandato per la coltivazione selettiva di funghi da campioni misti.

Principio

Potato dextrose agar (PDA) contiene destrosio come fonte di carboidrati che serve come stimolante della crescita e infusione di patate che fornisce una base nutritiva per la crescita rigogliosa della maggior parte dei funghi. L’agar viene aggiunto come agente solidificante. Una quantità specificata di acido tartarico sterile (10%) può essere incorporata per abbassare il pH del mezzo a 3,5 in modo che la crescita batterica sia inibita.

Bisogna fare attenzione a non riscaldare il mezzo acidificato; il riscaldamento allo stato acido idrolizzerà l’agar che può rendere l’agar incapace di solidificare.

Composition of PDA

*4.0gm of potato extract is equivalent to 200gm of potato infusion

If supplement added: tartaric acid – 1.4 gm (pH-3.5 +/- 0.3 at 25°C)

Chloramphenicol – 25 mg ( pH-5.6 +/- 0.2 a 25°C)

Clortetraciclina – 40 mg

Procedura per la preparazione di supporti

1. Sospendere 39 grammi di supporti disidratati (forniti da fornitori commerciali) in 1000 ml di acqua distillata. Riscaldare a ebollizione per sciogliere completamente il mezzo.
2. Sterilizzare in autoclave a 15 libbre di pressione (121°C) per 15 minuti. Mescolare bene prima dell’erogazione.
3. In lavori specifici, quando è richiesto pH 3,5, il mezzo deve essere acidificato con acido tartarico sterile al 10%. La quantità di acido necessaria per 100 ml. di mezzo sterile raffreddato è di circa 1 ml. Non riscaldare il mezzo dopo l’aggiunta dell’acido.
4. Per l’elaborazione del campione, striscia il campione sul medium con un ciclo sterile di inoculazione per ottenere le colonie isolate.
5. Incubare le piastre a 25 – 30°C in posizione invertita (lato agar verso l’alto) con umidità aumentata.
6. Le colture devono essere esaminate almeno settimanalmente per la crescita di funghi e devono essere tenute per 4-6 settimane prima di essere segnalate come negative.

Risultato

I lieviti cresceranno come colonie da cremose a bianche. Le muffe cresceranno come colonie filamentose di vari colori.

morfologia Tipica di colonia di funghi

Contare il numero di colonie e considerare il fattore di diluizione (se il campione è stato diluito) per determinare i conteggi di lievito e/o muffa per grammo o millilitro di materiale.